Az apicomplexan paraziták listája. 5 Replies to “Foraminifera parazita vagy sem”


Itt kombináljuk a globális foszfo-proteomikai elemzést a kinome-szerű fordított genetikával, hogy értékeljük a fehérje-foszforiláció fontosságát a Plasmodium falciparum asexual proliferációjában. Az apicomplexan paraziták listája parazitafehérje-kináz önmagában foszforilálódik feltételezett szabályozói maradékokon, beleértve a PfGSK3 és a PfCLK3 aktivációs hurok tirozinjait is; kimutattuk, hogy a PfCLK3 Y foszforilációja elengedhetetlen a teljes kináz aktivitáshoz.

A kinome-szerű fordított genetikai stratégia 36 parazita kinázt azonosított az eritrocitás schizogónia szempontjából.

Foraminifera parazita vagy sem

Ezek a vizsgálatok nemcsak a fehérje-foszforiláció által szabályozott folyamatokat tárják fel, hanem meghatározzák a maláriaellenes gyógyszerek lehetséges célpontjait a parazita kinomán belül. Bevezetés A malária évente még több mint 1 millió embert öl meg, és a morbiditás forrása, amely komoly akadályt jelent számos második és harmadik ország társadalmi és gazdasági fejlődésében 1.

Meglepő módon, annak ellenére, hogy a fehérje-foszforiláció egy univerzális szabályozó mechanizmus, amelyet számos humán betegségben gyógyszeres célpontként mutatnak be, a maláriaparaziták nagyrészt eltérő fehérje-kinázjainak és foszfó-jelző kaszkádjainak megcélzásának lehetősége 2, 3.

Ennek az elhanyagolásnak az egyik tényezője az, hogy a foszforiláció szerepét a Plasmodium falciparum legvirulensebb humán maláriaparazitájának biológiájában a foszforiláció szerepével kapcsolatban komolyan gyógyszer férgek helmostop. Két független genomi elemzés az apicomplexan paraziták listája a P.

  1. Gyermekek férgekhez való előkészítése fórum
  2. PUBLIKÁCIÓS LISTA. Dr. Békési László Szabolcs - PDF Free Download

Ebben a tekintetben a malária és a humán kinomok hasonlóak, mivel nagy és változatos géncsaládok, amelyek természetesen a humán kinome esetében több szabályozási módot és változatos sejtalapokat képeznek. Az általános hasonlóság ellenére azonban a malária és az emlős fehérje kinázok közötti szekvenciahomológia sok esetben korlátozott, és ennek következtében számos Plasmodium protein kináz nem rendelkezik ortológokkal az emberi gazdaszervezetben.

Ezek közé tartoznak a kalciumfüggő kinázok CDPK-kamelyek szorosan hasonlítanak a növényi kinázokra, ahol a kináz-domén egy 7- es kalodulin-szerű doménhez, valamint a P. Továbbá, a P. Az emberi és maláriális kinomák közötti jelentős filogenetikai sokféleség alapját képezheti a malária-kinome 2 szelektív célzásának. Bár ez egy vonzó fogalom, nagyon kevés információ áll rendelkezésre a fehérje-foszforiláció szerepéről a Plasmodium biológiában, és ezért nehéz megjósolni a malária-kinázokra és foszforilációs útvonalakra ható gyógyszerek potenciális hatékonyságát és sejt-hatásait.

Ebben a fényben kombináltuk a kinome-kiterjedő gén knockout és fordított genetikát a globális foszfoproteomikával, hogy megvizsgáljuk a fehérje foszforiláció fontosságát P. Vizsgálataink azt mutatják, az apicomplexan paraziták listája a P. Ez a meglepő redundanciahiány nemcsak az egyes fehérje-kinázok kulcsfontosságú szerepére, hanem a maláriaellenes protein-kináz-célpontok potenciálisan bőséges forrásaira is utal.

Az, hogy ezek a fehérje-kinázok a biológiai aktivitások sokféleségét szabályozzák, a foszfoproteóma természete nyilvánvalóvá válik, amelyre itt utalunk, hogy számos olyan kulcsfontosságú folyamatban szerepet játszó fehérjéket tartalmaz, mint a vörösvérsejtekbe történő invázió, metabolizmus, transzkripció és DNS-replikáció.

A maláriaparazitákban a fehérje-foszforiláció komplexitását hangsúlyozta parazita lamblia gyógyszer, hogy a klasszikus tirozin-kináz-család hiánya ellenére a P.

Eredmények Kinome-szerte fordított genetika P. Ezt homológ rekombinációval, egyetlen keresztezett gén-zavaró stratégiával S1-S3 kiegészítő ábrák sikerült elérni.

A KO vektor integrációját 27 ePK gén hosszabb ideig tartó legalább 90 napos tenyésztése után nem figyeltük meg, ami azt jelzi, hogy az ezen gének által kódolt enzimek valószínűleg kulcsfontosságú szerepet játszanak a parazita aszeksuális proliferációban 1.

E 27 lókusz többségének 22 esetében külön-külön transzfektáltuk a 3D7 parazitákat jelölő vektorokkal, amelyek C-terminális tag hemagglutinin, Myc vagy zöld fluoreszcens fehérje az apicomplexan paraziták listája lettek kialakítva az ePK kódolási szekvenciával kiegészítő ábra S1.

Ezt a komplementációs megközelítést most alkalmazhatjuk ezen enzimek részletes funkcionális vizsgálatára, például a komplementáló gén specifikus mutációinak hatását vizsgálva, nevezetesen a gatekeeper maradék mutációkat, amelyek túlérzékenyek a terjedelmes gátlókkal szemben lásd alább. Teljes méretű asztal Összességében a címkézési és komplementációs megközelítések erőteljesen utalnak arra, hogy 22 ePK esetében a KO vektor integrációjának hiánya nem a rekombináció lokusz refraktivitása, hanem valószínűleg annak köszönhető, hogy ezek az ePK-k kulcsfontosságú szerepet játszanak az eritrocita asexual ciklusban, a malária patogenezisért felelős folyamat.

Ezért a jelen tanulmány 25 olyan ePK-k számát mutatja, amelyek nagy valószínűséggel kulcsfontosságú szerepet töltenek be a P. Ezzel szemben kimutattuk, hogy a KO vektor integrálódik a 32 ePK gén lokuszába.

Hat esetben jelezve az 1. Úgy véljük, hogy ezek a gének valószínűleg lényegesek; A klónozott populációk genotipizálása szükséges az ePK-gének e részhalmazának ezen értelmezésének validálásához. Ezen az apicomplexan paraziták listája közül az egyik, a ciklikus AMP cAMP -függő kináz PfPKA, lényeges szerepet játszik továbbá az a megfigyelés, hogy a transzgénikus paraziták, amelyek mutáns cAMP-függő foszforilációs helyeket expresszálnak az apikális membrán antigén 1 fehérjében, jelentősen károsodnak.

Mindezek közül ben szilárdan meghatároztuk, hogy korlátozott hígítással megszakított lókuszú parazita klónokat kaptunk. Teljes méretű asztal Összefoglalva, az alapvető funkciók első értékelése azt mutatja, hogy a P. Ezzel ellentétben a 12 határozottan elengedhetetlen, amint azt az életképes parazita klónok bizonyítják, amelyekben a releváns gének inaktiválódnak a 2. Ez a folyamat foszfoproteint azonosított, amelyek közül 26 humán fehérje és parazita volt 1.

Összességében egyedi foszforilációs helyet azonosítottunk, amelyek túlnyomó többsége a parazita által kódolt fehérjéknél történt 1b. Az ezekben az elterjedt lemezekben bemutatott foszfo-peptideket a vizsgált hat biológiai replikáció közül legalább kettőben figyelték meg, és egyedi foszfo-peptid teljes adatsorából származtak, amelyeket szigorú kritériumok alapján szűrtek ki, beleértve a számítási elemzést és a kézi az apicomplexan paraziták listája.

Ezt a protokollt phylum aschelminthes képek biológiai replikáción végeztük, hogy létrehozzuk az ebben az ábrában összefoglalt foszforilációs helyek listáját, és részletesen ismertettük az 1-es és 2-es kiegészítő adatokat ACN; acetonitril, IMAC; immobilizált fém affinitáskromatográfia, Ti02; titán-dioxid.

A gén ontológia leképezést és további megjegyzéseket az alapértelmezett Blast2GO paraméterekkel végeztük. Teljes méretű kép Az általános celluláris aktivitásokban szerepet játszó foszfoproteinek, például az anyagcsere, a DNS-replikáció és a gén-transzkripció 1b. Ábra azonosításán túl sok foszfoproteint is társítottak parazita-specifikus folyamatokhoz, például cyto-adhézióhoz pl. A vörösvérsejtekbe történő parazita invázió egy komplex folyamat, amely magában foglalja a merozoita kötődését, az újraszervezését, a merozoit bevonófehérjék eloszlását és az önmagában történő inváziót Ábra, 3.

A RhopH az apicomplexan paraziták listája részeként felépített egyik Rhoptry fehérje, a 3. Ez az ellenanyag a foszfo-CLAG 3. Egy nemrégiben közzétett jelentés, amely a CLAG3.

Frakciókból származó eredményeket az RQ oszlop elúciója mutatja. A kontroll mintákat nem kezeltük foszfatázzal. A frakciót ezután az anti-foszfo-CLAG 3.

Posts navigation

A foszfo-CLAG 3. A mintákat 4, 6-diamidinofenil-indollal kék festettük a magok jelölésére. A skála sávja 2 μM. A bemutatott kísérletek legalább három független kísérletet reprezentálnak. Teljes méretű kép Teljes méretű asztal Aktiválási hurok parazita protein kinázok treonin foszforilációja A globális foszfo-proteomikus vizsgálat kimutatta, hogy legalább 23 protein-kináz foszfoprotein 4.

Ezeket a foszforilációs helyeket dr. Edwin Lasonder és Pietro Alano személyes kommunikáció által végzett foszfo-proteomiás vizsgálatban, valamint a PfPKA elleni anti-foszfó T antitestekkel és a PfPKG elleni anti-foszfó T antitestekkel végzett Western blot kísérletekkel igazoltuk kiegészítő ábra. A Pfcrket és Pfcrkt felfelé elhelyezkedő P. A parazita protein kinázok aktivációs hurok tirozin foszforilációja Annak ellenére, hogy a P.

Ábra, b. Továbbá, anti-foszfotirozin antitestek alkalmazásával kimutattuk, hogy a fertőzött vörösvértestek RBC-k jelentősen megnövekednek a tirozin-foszforilációban a nem fertőzött kontrollok felett, és hogy a tirozin foszforiláció többsége kimutatható a parazita frakcióban 3c. Úgy tűnik tehát, hogy a tirozin-foszforiláció a parazitafórikus vakuolban beleértve a parazitát is magában foglaljanem pedig kizárólag a gazdaszervezet eritrocitájában fordulhat elő.

Mielőtt autoradiográfiát az apicomplexan paraziták listája jobb oldali panela gélt Coomassie kék-vel festettük bal oldali panel. Ez egy olyan kísérlet autoradiográfiája, ahol a foszforilezett aminosav-standardok pozíciói jelennek meg.

az apicomplexan paraziták listája paraziták az éhség tünetei

Az egyes szabványoknak megfelelő foltokat eltávolítottuk, és a radioaktív tartalmat folyadékszcintillációs számlálással határoztuk meg.

Ezután kiszámítottuk az egyes foszfo-aminosavakhoz kapcsolódó relatív radioaktivitási mennyiségeket. A három független kísérlet reprezentatív eredménye. A kontrollok bakteriális lizátumok és nem fertőzött RBC lizátumok voltak.

PUBLIKÁCIÓS LISTA. Dr. Békési László Szabolcs

A fehérjék terhelésének meghatározására a géleket Ponceau festéssel festettük. Teljes méretű kép A globális foszforilációs analízisből származó tirozin-foszforilált parazitafehérjék legtisztább példája a parazita protein kinázok tirozin-foszforilációja az aktivációs hurokban. Ábra keresztreagálnak, hogy meggyőződjenek arról, hogy a PfGSK3 valóban foszforilálódott Y en a vízszintes szakaszban 3g.

Terjedésük vízzel ivóvíz, uszodai víz, természetes vizek gyakoribb, mint élelmiszerekkel, az utóbbi módon többnyire a megtámadott háziállatok húsa fertőz. Gyakori fő gazdaszervezetek a macska, kutya, sertés és más háziállatok, és az ember csak köztesgazda, viszont több esetben az ember a parazita elsődleges élőhelye. Bár főleg csak a gyomor-bél betegségeket okozó protozoonokat tárgyaljuk, említést érdemel, hogy az emberiség egyik legnagyobb ellensége, a százmilliókat megbetegítő Plasmodium malariae szintén protozoon. Az amőbás dizentéria régóta ismert betegség, amelyet az Entamoebahistolytica okoz. A baktériumos vérhasnál enyhébb lefolyású, de sok esetben tünetmentes vagy hosszantartó, krónikus betegség.

Továbbá kimutattuk, hogy a rekombináns fehérjeként expresszált PfGSK3 a baktériumokban is Y nél foszforilálódott 3f. További tirozin-foszforilációt detektáltunk a P. Ábra aktivációs hurokjában, amely szintén valószínűleg esszenciális kináz 1.

Plasmodium

A filogenetikai elemzések azt mutatják, hogy ezek a két kináz egy olyan klaszterhez tartoznak, amely a DYRK 4, 29 alcsaládot is tartalmazza. A globális foszforilációs vizsgálat megállapította, hogy a PfCLK3 ebben a motívumában az tirozin in vivo foszforilálódott 4a.

Ábra, begy pY elleni antofoszfopeptid antitest alkalmazásával igazolt megfigyelés 4c. Ezeket a baktériumokat lizáltuk, és a kivonatot 20 μg a PfCLK3 középső panel vagy a tirozin elleni antitestek ellen PfCLK3 jobb oldali panel elleni antitestekkel vizsgált nyugati blotokban használtuk.

A minták coomassie-foltja a bal oldali betöltési kontrollként az apicomplexan paraziták listája meg.

Tartalomjegyzék

A foszforilált szubsztrátok az apicomplexan paraziták listája autoradiográfiája látható, ugyanazon gél coomassie-foltjával, mint a töltésszabályozás. Teljes méretű kép Ezt a PfCLK3-on történő foszforilációt valószínűleg az auto-foszforiláció okozta, hogy a bakteriálisan expresszált PfCLK3-t foszforiláltuk az tirozinon 4c.

Megállapítottuk továbbá, hogy a bakteriálisan expresszált PfCLK3 képes in vitro foszforilálni a mielin bázikus fehérjét 4f. Ezek az eredmények összhangban vannak azzal az elképzeléssel, hogy ez a protein kináz DYRK. Ezért adataink arra utalnak, hogy a PfCLK3 az os tirozin enzimaktivitás szempontjából fontos, de az expressziós szintek szabályozása, a szubcelluláris lokalizáció vagy az aktiválási hurokon kívüli további foszforiláció révén további szabályozás is működik a PfCLK3 kináz finomhangolására.

Ezeket a tirozin-foszforilált fehérjéket azonban csak egy biológiai replikációban figyelték meg, és így nem szerepelnek a 2.

Békési László Szabolcs 1.

Az a tény, hogy csak egyszer láttuk ezeket a tirozin-foszfor-peptideket, a foszfo-aminosav-analízisből kitűnik, hogy a tirozin-foszforilált fehérjék rendkívül alacsony száma 3b. Jelenleg vizsgáljuk ezt a lehetőséget. Vita Az itt bemutatott fordított genetikai vizsgálat megkísérli meghatározni, hogy mely parazita ePK-k szükségesek az eritrocitákban az asexual ciklus befejezéséhez. Érdekes, hogy az 1. Például szinte az összes CMGC-csoport kináz és minden aurora-kapcsolódó kináz alapvetőnek tűnik az asszexuális ciklusban, míg a 4 NimA-hoz kapcsolódó kináz közül 3 nem szükséges, az életciklus különböző szakaszaiban a specifikus funkciókra vonatkozó különböző követelményeket szemléltetve.

A nem-lényegesség formális bemutatása a klonális vonalak genotípust igényli, amely jelenleg a 2. Bár nagyon valószínű, hogy a fennmaradó 14 kináz amelyek a 2. Bár az inaktivált ePK génnel rendelkező paraziták többsége nem mutatott nyilvánvaló növekedési hibákat, két esetet figyeltünk meddig, mióta a tabletta férgek kialszanak PfPK7 PFBw 32 és Pfcrk-5 PFFwahol az ePK megszakítók lassú parazitaemiás növekedési görbét mutattak tipikus növekedési görbék jelennek meg az S6 és S7 Kiegészítő ábrákon ezen két gén genotipizálási adatai mellett ; a PfPK7 KO fenotípus részletes tanulmányozása Lehetnek további kinázok, amelyek deléciója növekedési fenotípust eredményez; ebben a Vedikus gyógyszerek az emberek parazitáira az átfogó értékelésnek meg kell várnia a klónok elérhetőségét minden olyan esetben, amikor a gén megszakítása megtörtént.

A PfeIK1 aszeksuális parazitákban expresszálódik, és kimutatták, hogy szükséges a PfeIF2a éhezésfüggő foszforilációjához az eritrocitás ciklus alatt 33, míg a PfeIK2 elsősorban a szexuális fejlődés során fejeződik ki, az apicomplexan paraziták listája szükséges a májfázis-specifikus gének korai fordulásának megelőzéséhez nyálmirigy sporozoitákban.

Érdekes, hogy a PfPK4 P. Ha a funkciója valójában megakadályozza a PfeIF2α foszforilációjával történő általános transzlációt amint azt az apicomplexan paraziták listája eIF2α-peptid in vitro 35 foszforilációjának képessége is sugalljaaz következik, hogy a transzlációs faktor foszforilációjával történő transzlációs gátlás az erythrocyticus bizonyos szakaszában alapvető jellemzője.

Egy tesztelhető az apicomplexan paraziták listája az, hogy ez a merozoita ontogeniában és érett merozoitákban, a ciklus egyetlen szakaszában az apicomplexan paraziták listája, ahol a fordítás lényegében inaktív.

Figyelemre méltó az a tény, hogy az eddig vizsgált, megszakított kináz génnel rendelkező elérhető parazita klónok egyike sem mutat nyilvánvaló fenotípust a gametocytogenesis sebességében; mindaddig, amíg az összes populációt klónoztuk és fenotípusosítottuk egy megszakított génnel, természetesen nem zárhatjuk ki annak a lehetőségét, hogy ezen enzimek egyike szükséges a gametocytogenesishez.

Bizonyos ePK-k, amelyek nem nélkülözhetetlenek az asszexuális növekedéshez, már bizonyítottan szükségesek a 32, 36 szúnyogháló sikeres fertőzéséhez; ennek fényében jelenleg a szúnyogok összes nem esszenciális ePK-jának KO-klónjainak fenotípusát célozzuk meg.

Adataink azt mutatják, az apicomplexan paraziták listája összesen 36 ePK 1. Összehasonlításképpen, a rágcsáló malária parazita 66 pPP-jének egy újabb tanulmánya 43 olyan protein-kinázt azonosított, amelyek refraktívak a vérplazma deléciójára, és as génjei törölhetők 37 S1 kiegészítő az apicomplexan paraziták listája.

Bár az egérparazitában elengedhetetlenül azonosított ePK-k és a P. Hangsúlyozzuk itt, hogy a formális bizonyíték arra, hogy egy adott ePK gén nem nélkülözhetetlen az asszexi skizogóniához, megköveteli a populációkból származó klónok elemzését, amelyek bizonyítékot mutatnak a gén megszakítására vagy törlésére; ezt az egész P.

az apicomplexan paraziták listája egyszerű paraziták elleni gyógyszer

Összességében az itt bemutatott foszfoproteomikus analízis azt mutatja, hogy a fehérjefoszforiláció széles körben alkalmazható a sejtes folyamatok szabályozásában a P. Ez nemcsak az általános házfelügyeleti funkciókat foglalja magában, mint például az anyagcsere, a DNS-replikáció és a transzkripció, hanem a parazita-specifikus folyamatok, például a vörösvérsejt-invázió és a cyto-tapadás. Továbbá, a tirozin-foszforiláció azonosítása az esszenciális protein-kinázok aktivációs hurokjában bizonyítja, hogy a tirozin-foszforiláció az apicomplexan paraziták listája a vérplazma parazita életképességében.

A fehérje-foszforiláció fontosságát az az apicomplexan paraziták listája maláriaparazita életképességében tovább erősíti az a tény, hogy a paraziták ePK-k fele valószínűleg a vérplazma paraziták számára alapvető fontosságú. Tehát a kiterjedt foszfoproteóma, valamint az ePK-k sokaságának redundanciájának hiánya alátámasztja azt az elképzelést, hogy a parazitafehérje foszforilációjának a vérfázisban történő megcélozása hatékony stratégiát jelenthet a P.

Az emberi betegségben a célzott fehérje-kinázok egyik fő hátránya az, hogy a szelektív inhibitorok nehezen generálhatók, mivel sok gátló a 38 konzervált ATP-kötőhelyet célozza meg. Lehetséges azonban az ATP-kompetitív inhibitorok szelektivitásának megteremtése az inhibitor molekulák kölcsönhatásának kiterjesztésével a nem konzervált alloszterikus helyekre, amelyek az ATP-kötőhely melletti hidrofób zsebben helyezkednek el, 38, Ezt a stratégiát sikeresen alkalmazták számos, a rák 40 kezelésére szolgáló humán kinázok kezelésére tervezett protein kináz inhibitorokra, beleértve a klinikailag jóváhagyott Bcr — Abl inhibitor Imatinib Gleevec et is.

A kábítószer-tervezés hasonló megközelítése hatékony lehet a malária elleni szelektivitással rendelkező molekulák keresése során, és ezt a humán és plazmális kinomák közötti jelentős filogenetikai sokféleség 4 támogatja. Egy ilyen stratégia a farmakológiai vegyületekre támaszkodik, és hozzáférést biztosít az alloszterikus helyekhez.

Ezt elsősorban az V régió β5 szálán lévő gatekeeper-maradék határozza meg, amely távol van az aktív helytől és a csuklórégió szomszédságában.

Ha az átjáró maradék nagyméretű például fenilalaninakkor az alloszterikus helyekhez való hozzáférés blokkolódik, míg egy kis például treonin vagy akár egy közepes méretű metionin gatekeeper maradék lehetővé teszi a hozzáférést Fontos megemlíteni, hogy a as fehérjék kinázából, amely valószínűleg elengedhetetlen a 4-es vérplazmához, egy kis gatekeeper-maradék treonin és es közepes méretű átjáró metionin.

Az alloszterikus helyek hozzáférhetőségének kihasználása ezekben az enzimekben egy stratégia a parazitaölő aktivitással rendelkező szelektív parazita protein kináz inhibitorok kifejlesztésére.

Lehetséges, hogy ezeknek az új kináz inhibitoroknak az egyik forrása megtalálható a legutóbbi szűrőprogramokban, amelyek több ezer maláriaellenes aktivitással rendelkező kémiai entitást azonosítottak, amelyek közül soknak kemo-formái vannak összhangban a protein-kináz inhibitorokkal E képernyők eredményeinek bányászása a lényeges parazitafehérje-kinázokat és foszforilációs útvonalakat célzó gyógyszer-szerű vegyületek azonosítására potenciális utat biztosíthat a maláriaellenes szerek következő generációjának.

Mód Hozzáférés a foszfo-proteomikus adatokhoz Az ebben a vizsgálatban megfigyelt összes manuálisan validált foszfo-peptidet az 1.

az apicomplexan paraziták listája hogyan lehet a fergeket kiuriteni a testbol

A klónozó primerek a 3-as kiegészítő adatokban találhatók. A komplementációs plazmidok kialakítása A kiválasztott ePK-k in vivo epizomális expressziójára szolgáló plazmidokat lásd az 1. Gateway LR klonáz reakcióval a gyártó utasításai szerint Invitrogen. A parazitákat, amelyek mind a kiütéses az apicomplexan paraziták listája, mind a komplementációs plazmiddal transzfektáltuk, kettős hatóanyag-szelekció tenyésztési módszerek alkalmazásával tenyésztettük.

Foszfo-aminosav-analízis A mágneses cellákkal tisztított iRBC-t 50 μl pellet térfogat μl Krebs pufferben foszfátmentes reszuszpendáltuk, és 20—25 μl friss 32P-ortofoszfáttal inkubáltuk 30 percig 37 ° C-on.

Navigációs menü

A lizátumot 2-D tisztító készlet Amersham Biosciences alkalmazásával állítottuk elő és tisztítottuk a gyártó utasításainak megfelelően. A végső szemcséket rövid ideig levegőn szárítottuk, és 20 μl 6 M HCl-ben szuszpendáltuk, és azonnal előmelegítettük ° C-os kemencébe hidrolízis céljából.

A felülúszó frakciókat 30 ° C-on szárítottuk speedvac centrifugán. A pelleteket 40 μl Hban feloldottuk, és ismét speedvac-on szárítottuk. Az utolsó eljárást az apicomplexan paraziták listája kétszer megismételjük. Az egyes minták 10 μl térfogatát 1 μl jelöletlen foszfor-aminosav-standardok, amelyek 1, 5 mg mindegyik foszfo-szerint, foszfo-treonint és foszfo-tirozint tartalmaznak 1 ml teljes térfogatban.